Voges-Proskauer Experiment på bakterier för att hitta deras förmåga att utnyttja glukos (med figur)

Läs den här artikeln för att få veta om Voges-Proskauer-testet (VP-testet) på bakterier för att ta reda på deras förmåga att använda glukos med produktionen av acetylmetylkarbinol!

Princip:

Vissa bakterier har förmåga att använda glukos och omvandla den till acetylmetylkarbinol (aceton), vilket är en neutral slutprodukt.

Dessa bakterier metaboliserar initialt glukos till pyruvsyra, som metaboliseras ytterligare via metabolisk mellanättättiksyra till acetylmetylkarbinol (acetoin) och C02 via "butylenglykolvägen".

Acetylmetylkarbinol oxideras till diacetyl i närvaro av a-naftol under alkaliskt tillstånd (40 procent KOH). Diacetyl reagerar med guanidin-gruppen av kreatin (från pepton som används i odlingsmediet) för att ge rosa rosa färg.

I Voges-Proskauer-testet (VP-test) odlas testbakterierna i en buljongmedium innehållande glukos. Om bakterierna har förmåga att utnyttja glukos med produktion av acetylmetylkarbinol (aceton) som den neutrala ändprodukten, erhåller buljongen en rosa rosa färg vid tillsats av a-naftollösning följt av 40% KOH.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, MR-VP-buljong (eller glukosfosfatbuljong), VP-lösning I (Barritts reagenslösning A) och VP-lösning II (Barritts reagenslösning B), isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Ingredienserna i MR-VP-buljongmedium (innehållande glukos som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml buljongen vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvlande (Figur 7.5). Den buljong som används för metylrödtest kan också användas här. Vanligtvis används samma buljong för både testen (MR och VP) samtidigt.

2. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 6, 9 med användning av 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. Buljongen fördelas i fem provrör (ca 10 ml vardera), bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

4. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

5. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

6. Provbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

7. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C i 48 till 72 timmar i en inkubator.

8. VP-lösning I (innehållande a-naftol) tappas i buljongörerna (0, 2 ml vardera) och blandas noggrant.

9. VP-lösning II (innehållande KOH) tappas i buljongörerna (0, 6 ml vardera), blandas noggrant och får stå i 30 minuter till 2 timmar.