Studieanmärkningar om avancerad flödescytometri

Den nedan nämnda artikeln ger studieanvisningar om förloppsflödescytometri.

Flödescytometri är den senaste tekniken som utvecklats under de senaste två decennierna för att studera cellinnehållet, särskilt kärnförpackningseffektivitet. Förutom NPE kan de fysikaliska och kemiska egenskaperna hos innehållet i de olika cellerna och patologiska förhållanden analyseras snabbt med korrekt slutsats.

Flödescytometrarna är tillgängliga på marknaden i form av en maskin. Maskinen består av vätskesystem, ett optiskt system för att samla in ljussignaler som genereras som celler som passerar genom lasern. Maskinen är också försedd med elektroniskt system som omvandlar ljussignalerna till proportionella elektroniska signaler som i slutändan digitaliseras för datoranalys.

Omkring 5000 celler per sekund, som mäts individuellt efter varandra, från suspensionen av heterogen population kunde skannas.

Det sofistikerade designade Fludics-systemet är försedd med lasrar, optik, elektronik och sortering. Fludics-systemet har Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS Calibur-vätskesystem), under sortering kan det sortera enkelcellsräkningsnoggrannhet.

Resultatet är hög renhet med återhämtning som faller mellan enkelcell och återställning. Den har elektroniskt styrs med tre knappar för att välja PRIME, STAND BY och RUN operativläge. Hastigheten är kontroller som High; (60 lll / min), medium (35 lll / min) och Låg (12 lll / min).

Excitering och utsläpp, fluorokrom, filter och färgkompensation är den viktiga delen av utrustningen. 530/30 BP-filter mäter signaler som emitteras av fluorescensisotiocyanat (Stain). Om Phycoerythrin och Popidium Iodide används används 585/42 BP-filter. 650 LP-filter används om peridininklorofyll och 7-amino-aktinomycin D-signal genereras.

Lasersignalerna läses av Becton Dickinson Cell Quest-programvara. Florescentdetektor och bandfilter ska justeras enligt instruktion och krav på instrumentet. 488 nm Argonlaserljuskällor och 623 nm bandpassfilter är vanligtvis närvarande i utrustning.

Det har också ett system för att visa data och analys. De viktiga parametrarna är histogram, data med flera parametrar och listlägesdata och gating. Maskinanalysen av data med hjälp av mjukvaran som tillhandahålls och ger histogram av DNA-innehållet jämfört med antalet som visas automatiskt på datorn (49.2).

Applikationerna för flödescytometern är många och är en välsignelse för biologisk forskning och för de kliniska undersökningarna i många mänskliga sjukdomar. Flödescytometern används för att studera blodstammar i hemopoitisk vävnad i huvudceller från luftandningsfiskar.

Det kan vara lätt att skilja mellan den pluripotenta hematopoetiska stamcellen och fenotypen hos den mogna funktionella perifera lymfocytpopulationen. Den betydande användningen av denna utrustning är att studera apoptos eller celldöd och även att studera cellens nekro på grund av toxicitet i pesticider.

På grund av vinkelspridningssignaler är det möjligt att lösa lymfocyter, monocyter och granulocyter från lyserad helblodsprov. Det är också möjligt att skilja blodplättar från bakgrundsbruset. Det används för immunförsvar och immunofenotypning. Det används för att studera leukemi och lymfom, transplantationsforskning, retikulocyträkning och analys av cellulärt DNA-innehåll.

På grund av pulsbehandlingsmekanismen är det fördelaktigt vid DNA-cellcykelanalys. NPE-analys används för att differentiera primär bröstcancer och metastas, primär tjocktarmscancer och kolonmetastas samt mag- och äggstockscancer (figur 49.2).

Det använda protokollet är att de första cellerna avlägsnades och fixerades i 3% paraformaldehyd. De permeabiliseras med 0, 5% Triton x 100. Det nukleära DNAet märktes sedan med popidiumjodid efter RNase-behandling med användning av Test Plus DNA-kit med cykel.