Fenylalanin deaminiserar testet på bakterier för att ta reda på deras förmåga att deaminera aminosyran (med figur)

Läs den här artikeln för att lära dig om fenylalanin deaminiserat test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att deaminera aminosyran!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att deaminera aminosyran fenylalanin, eftersom de kan producera enzymet "fenylalanin deaminas".

Detta enzym deaminerar fenylalanin genom att avlägsna aminogruppen, varigenom fenylpyruvsyra (en keto-syra) och ammoniak (NH3) produceras. Fenylpyruvsyra bildar grön färg med järnkloridlösning.

I fenylalanin-deaminas-testet odlas testbakterien på agarskenor innehållande fenylalanin. Om bakterierna har förmåga att deaminera fenylalanin, ändras färgen hos skenorna från gult till grönt, när dropp av järnkloridlösning släpps på den.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, fenylalaninagar, ferrikloridlösning (10%), isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Beståndsdelarna i fenylalaninagarmedium (innehållande fenylalanin som huvudkomponenter) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvling ( Figur 7.17).

2. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7.2 med användning av 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre.

3. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

4. Innan det stelnar, fördelas mediet i varmt smält tillstånd i 5 provrör (ca 20 ml vardera).

5. Provrören är bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och hålles i ett lutande läge för att kyla och stelna mediet för att få fenylalaninagarskenor.

8. Testbakterierna ympas aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, genom att sträcka på ytan av skenorna med hjälp av en flamsteriliserad slinga. Slingan steriliseras efter varje ympning.

9. De inokulerade skenorna inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator.

10. 4-5 droppar järnkloridlösning (10%) sättes till varje snedställning.