Oxidas test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att hydrolysera gelatin genom att producera gelatinas

Oxidas test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att hydrolysera gelatin genom att producera gelatinas!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att hydrolysera gelatin, eftersom de kan producera det proteolytiska enzymet "gelatinas".

Medan gelatinet utfälls genom kvicksilverkloridproducerande translucens, blir dess hydrolyserade slutprodukter inte utfällda av kvicksilverklorid, för vilka de inte producerar sådan translucens, snarare ger transparens.

I gelatiniseratestet odlas testbakterierna på agarplattor innehållande gelatin. Efter att bakteriernas kolonier är synliga, floder plattorna med en lösning av kvicksilverklorid. Om bakterierna har förmåga att hydrolysera gelatin hydrolyserar kolonierna gelatin i mediet i de områden som omger dem, medan resten av plattorna sitter kvar i ohydrolyserat gelatin.

Som ett resultat bildas, när de översvämmas med en lösning av kvicksilverklorid, transparenta klara zoner runt kolonierna, eftersom de hydrolyserade produkterna som bildas kring dem inte bildar utfällningar med kvicksilverkloriden. Å andra sidan blir resten av plattans ytor genomskinliga, eftersom det ohydrolyserade gelatinet i dessa områden bildar utfällningar med kvicksilverklorid.

Material som krävs:

Petriskålar, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, Fraizer's gelatinagar, kvicksilverkloridlösning, isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Två petriskålar städas, täckas med hantverkspapper och binds med tråd eller gummiband (Figur 7.20). Detta steg såväl som steriliseringen av petriskålarna i steg 6 utelämnas om ugnssteriliserade petriskålar används direkt

2. Beståndsdelarna i Fraizers gelatinagarmedium (innehållande gelatin som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk flaska genom att skaka och virvla .

3. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7, 2 med 0, 1 N HCI om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

4. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

5. Kolven är bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De två petriskålarna och den koniska kolven innehållande Fraizers gelatinagarmedium steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och får svalna ibland utan att mediet solidiseras. Kylning av mediet förhindrar kondens och ackumulering av vattendroppar inuti plattorna. Om mediet redan har beretts och stelnat under lagring, måste det vara flytande genom att värma försiktigt tills det smälter fullständigt.

8. För att framställa gelatinagarplattor kyles och stelnar steriliserat Fraziers gelatinagarmedium i varmt smält tillstånd, aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i de två steriliserade petriskålarna (ca 20 ml vardera), så att det smälta mediet täcker botten av petriskålarna helt.

Därefter täcks plattorna med sina lock och får svalna för att stelna mediet i dem. Vattendamp som kan kondensera på plattans och lockens inre yta avdunstas genom att hålla plattorna och locken inverterad position i en inkubator vid 37 ° C under ca 1 timme.

9. Varje platta är märkt på undersidan till fyra fjärdedelar.

10. "Spotinoculation" av testbakterierna görs aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i mitten av varje kvart genom att göra en fläck (eller smet) av bakterierna med hjälp av en flamsteriliserad slinga. Slingan steriliseras efter varje ympning.

11. De inokulerade plattorna inkuberas i inverterad position, nedtill, vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator tills kolonierna hos bakterierna är synliga.

12. Plattorna översvämmas med lösning av kvicksilverklorid (HgCl2).