Metylrödtest för att ta reda på förmågan hos en bakterie att använda glukos (med figur)

Läs den här artikeln för att lära dig om metylrödtestet (MR-testet) för att ta reda på hur bakterier kan använda glukos med produktionen av en stabil syra som slutprodukt!

Princip:

Vissa bakterier har förmåga att använda glukos och omvandla den till en stabil syra som mjölksyra, ättiksyra eller myrsyra som slutprodukt.

Dessa bakterier metaboliserar initialt glukos till pyruvsyra, som vidare metaboliseras genom "blandad syraväg för att producera den stabila syran.

Den typ av syra som produceras varierar från art till art och beror på de specifika enzymatiska vägar som finns i bakterierna. Den så framställda syran minskar pH-värdet till 4, 5 eller lägre, vilket indikeras av en färgförändring av metylröd från gul till röd.

I metylrödtestet (MR-test) odlas testbakterierna i en buljongmedium innehållande glukos. Om bakterierna har förmåga att använda glukos med produktion av en stabil syra, ändras metylrödets färg från gul till röd när den läggs i buljongkulturen.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullspropar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, MR-VP-buljong (metylröd-Voges Proskauer buljong eller glukosfosfatbuljong), metylröd lösning, isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Ingredienserna i MR-VP-buljongmedium (innehållande glukos som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml buljongen vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvlande. MR-VP-buljong kallas även glukosfosfatbuljong (Figur 7.4).

2. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 6, 9 med användning av 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. Buljongen fördelas i fem provrör (ca 10 ml vardera), bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

4. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

5. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

6. Testbakterierna ympas aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, in i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

7. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator.

8. Alkohollösning av metylröd (3-4 droppar) tappas i varje provrör.

observationer:

1. Röd färg som produceras: MR positiv (dvs bakterierna har omvandlat glukos till en stabil syra, vilket indikeras genom omvandling av metylröd från gul till röd färg. Det indikerar blandad syrajäsning).

2. Röd färg som inte producerats: MR negativ (dvs glukosen i mediet har inte omvandlats till en stabil syra. Detta indikerar butylenglykolfermentering).