Lipidhydrolys-test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att hydrolysera lipider (med figur)

Läs den här artikeln för att lära dig om lipidhydrolys-testet, för att ta reda på bakteriernas förmåga att hydrolysera lipider (fetter)!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att hydrolysera lipider (fetter) till glycerol och fettsyror, eftersom de har lipolytisk enzym "lipas".

Dessa bakterier heter lipolytiska bakterier. Medan lipiderna bildar en emulsion bildar de, när de dispenseras i agar, producerande opacitet, deras hydrolyserade slutprodukter, glycerol och fettsyror inte sådan emulsion med agar, för vilka de inte producerar sådan opacitet; snarare skapa öppenhet.

I lipidhydrolys-testet odlas testbakterierna på agarplattor innehållande tributyrin som lipidsubstratet. Tributyrin bildar en emulsion, när den avges i agar, vilket ger ett ogenomskinligt medium.

Om bakterierna har förmåga att hydrolysera lipider hydrolyserar kolonierna tributyrinet i mediet i de områden som omger dem till lösliga glycerol och fettsyror (smörsyra), medan resten av plattorna innehåller ohydrolyserad tributyrin.

Som ett resultat bildas transparenta klara zoner runt kolonierna, eftersom de hydrolyserade produkterna, glycerol och fettsyror som bildas kring dem inte bildar emulsion med agar. Å andra sidan förblir resten av plattans ytor ogenomskinliga, eftersom det ohydrolyserade tributyrinet i dessa områden bildar en emulsion med agar.

Material som krävs:

Petriskålar, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, tributyrinagar, isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Två petriskålar städas, täckas med hantverkspapper och binds med tråd eller gummiband (Figur 7.22). Detta steg såväl som steriliseringen av petriskålarna i steg 6 utelämnas om ugnssteriliserade petriskålar används direkt.

2. Ingredienserna i tributyrinagarmedium (med undantag av tributyrin, som är lipidkomponenten) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvlande.

3. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7, 2 med 0, 1 N HCI om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

4. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

5. Efter kylning till ca 90 ° C tillsätts tributyrin och emulgeras i en Warring-blandare.

6. Kolven är bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

7. De två petriskålarna och den koniska kolven innehållande tributyrinagarmedium steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

8. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och får svalna under en tid utan att mediet solidiseras. Kylning av mediet förhindrar kondens och ackumulering av vattendroppar inuti plattorna. Om mediet redan har beretts och stelnat under lagring, måste det vara flytande genom att värma försiktigt tills det smälter fullständigt.

9. För att framställa tributyrinagarplattor, kyls och stelnar det steriliserade tributyrinagarmediet i varmt smält tillstånd det aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i de två steriliserade petriskålarna (ungefär 20 ml vardera), så att Det smälta mediet täcker helt ned petriskålen.

Därefter täcks plattorna med sina lock och får svalna för att stelna mediet i dem. Tributyrin bildar en emulsion, när den avges i agar, vilket ger ett ogenomskinligt medium. Vattendamp som kan kondensera på plattans och lockens inre yta avdunstas genom att hålla plattorna och locken i inverterad position i en inkubator vid 37 ° C under ca 1 timme.

10. Varje platta är märkt på undersidan till fyra fjärdedelar.

11. "Spotinoculation" av testbakterierna görs aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i mitten av varje kvart genom att göra en fläck (eller smet) av bakterierna med hjälp av en flamsteriliserad slinga. Slingan steriliseras efter varje ympning.

12. De inokulerade plattorna inkuberas i inverterad position, nedtill, vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator tills kolonierna hos bakterierna är synliga.