Vätgasförsörjat test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att producera väte (med figur)

Läs den här artikeln för att lära dig om det vätgaslevererade testet på bakterier för att ta reda på deras förmåga att producera väte!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att minska svavel till vätesulfid. Det är en färglös gas som reagerar med järn (järnhaltiga salter) för att ge svarta fällningar av järnsulfid.

Det reagerar också med blyacetat för att ge svarta fällningar av blysulfid. Vätesulfidprov (H, S-test) kan göras på två sätt, baserat på svavelkällan.

De är som följer:

(jag) H 2 S-test med oorganisk svavelkälla

(Ii) H 2 S-test med organisk svavelkälla

(i) H2S-test med oorganisk källa av svavel:

I detta test odlas testbakterierna på trippel-sockerjärnagaragar (TSI-agarskenor), vilka innehåller glukos, sackaros, laktos, fenolrött, natriumtiosulfat och järnsulfat. Om bakterierna använder den oorganiska svavel (natriumtiosulfat) som används i mediet, produceras H2S, vilket kombinerar med järnsulfatet i mediet för att bilda svarta fällningar av järnsulfid vilket resulterar i en förändring av rumpens färg till svart .

Förutom att använda oorganisk svavel, om bakterierna kan utnyttja någon av de tre sockerarterna (glukos, sackaros eller laktos), produceras syra vilket minskar mediumets pH. Som ett resultat ändras skenans färg från rött till gult.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, isolerande kolonier med trippel sockerjärnsagar (TSI agar) eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Ingredienserna i TSI-agarmedium (innehållande 3 sockerarter och järn som huvudkomponenter) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk flaska genom skakning och virvlande (Figur 7.13).

2. pH-värdet bestäms med pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7.4 med 0, 1 N HCI om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

3. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

4. Innan det stelnar, fördelas mediet i varmt smält tillstånd i 5 provrör (ca 20 ml vardera).

5. Provrören är bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och hålles i ett lutande läge för att kyla och stelna mediet för att få TSI-agarskenor.

8. Testbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminärflödeskammare, in i skenorna genom att sticka in i rumpan och strimma på ytan av skenorna med hjälp av en flamsteriliserad nål. Nålen steriliseras efter varje ympning.

9. De inokulerade skenorna inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar i en inkubator.

observationer:

1. Rörets färg ändras till svart: H 2 S positiv.

2. Rörets färg ändras inte till svart: H 2 S negativ.

(ii) H2S-test med användning av organisk källa av svavel

I detta test odlas testbakterierna i cysteinbuljong, som innehåller cystein som den organiska källan till svavel. Om bakterierna använder den organiska svavel (cystein) som används i mediet med hjälp av dess enzym "cystein-desulfuras", produceras H2S. Denna H 2 S kombinerar med blyacetatet nedsänkt i ett papper för att bilda svarta fällningar av blysulfid, vilket resulterar i en förändring av pappersremmens färg till svart.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, cysteinbuljong, Whatman filterpappersremsor, blyacetatlösning (mättad), isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Ingredienserna i cysteinbuljongmedium (innehållande cystein som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml buljongen vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvling ( Figur 7.14).

2. pH-värdet bestäms med pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7, 5 med 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. Buljongen fördelas i fem provrör (ca 10 ml vardera), bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

4. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

5. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

6. Testbakterierna ympas aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, in i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

7. En liten remsa av papper som blötläggs i blyacetatlösning (mättad) fixeras vid munnen av varje provrör på ett sådant sätt att en lång del av den förblir inuti provröret och en liten del förblir utsidan.

8. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C i 48 timmar i en inkubator.

observationer:

1. Färg av blyacetatremsor ändras till svart: H 2 S positiv.

2. Färg av blyacetatremsor ändras inte till svart: H 2 S-negativ.