Fluorescerande i situ-hybridisering (FISH)

I denna artikel kommer vi att diskutera om fluorescerande i situ-hybridisering (FISH).

Det är en laboratorie teknik som används för att bestämma hur många kopior av det specifika segmentet av DNA som finns i en cell. Det identifierar specifika kromosomala regioner i cytologiska preparat. I laboratoriet modifieras ett segment av DNA kemiskt eller färgas med fluorescerande färgämne och när det undersöks under fluorescerande mikroskop ser det mycket ljusstrålande fluorescerande ut.

Fluorescens in situ hybridisering har kraftigt ökat känsligheten, specificiteten och upplösningen av kromosomanalysen.

Fördelarna med denna teknik är många men vissa nämns enligt följande:

(1) Upplösningen av denna metod är mycket bättre än den för traditionell kromosombandning och cirka 2 megabaser (Mb) i längd.

(2) Protokollet i denna teknik är lätt och är tillämpligt för både delande celler såväl som icke-delande celler. Denna teknik kan identifiera en rad mutationer inklusive borttagning, dubbelarbete, aneuploidi och närvaro av derivatkromosomer. Denna teknik används också ofta för att övervaka återkommande eller kvarvarande sjukdom hos benmärgstransplantationspatienter.

FISH (fluorescerande in situ-hybridisering) utförs generellt på stimulerat perifert blod för både kromosomalanalys och identifiering av specifik translokation och deletion. Det används till exempel för att visa Philadelphia-kromosom (Ph 1 ) som bildas av translokationen mellan kromosom 9 och 22 och orsakar kronisk myelogen leukemi (CML).

Det används också vid identifieringen av translokationen mellan kromosom 8 och 14 som orsakar Burkitt lymfom och mellan kromosom 18 och 14 som resulterar i B-cell leukemi. Det används också för diagnos av Downs syndrom.

Vid FISH-proceduren kan cellkulturer framställas. Metafas / prometafas kromosomer fixeras på en glasskiva. Dessutom kan FISH modifieras för analys av interfaskärnor. Sedan denomineras kromosomerna; en märkt DNA-prob introduceras sedan och sedan sond hybridiseras till kromosomen på glidbanan. Därför ges termen "in situ" -hybridisering.

DNA-proberna är märkta med fluorokrom, en sådan sond ger fluorescerande signal och kunde ses med fluorescensmikroskopi. Fluorescensen kunde dras av med hjälp av filter fästa i fluorescerande mikroskop.

FISH-prober är ungefär 40 kilo baser (kb) i längd och detekteras som en dubbel fluorescerande signal på varje medlem av ett kromosompar. Dubbelpunkten motsvarar signalerna från var och en av de två inriktade systerskromatiderna.

I sin enkla applikation skulle ett normalt FISH-mönster för en sådan sond vara två uppsättningar dubbla punkter, en uppsättning för varje medlem av de normalt parade kromosomerna. Dessa dubbelpunkter säkrar ofta för att bilda en signal. Celler monosomiska för den aktuella kromosomala regionen skulle bara visa en enda uppsättning dubbelpunkt per kärna, medan trisomceller skulle visa tre uppsättningar dubbelpunkter.