Experiment: Motilitetstest av bakterier: Genom att hänga droppberedning (med figur)

Syfte att utföra motilitetstest av en bakterie, genom att hänga droppberedning, för att ta reda på om det är rörligt eller icke-motilt.

Ändamål:

Motilitet betyder rörelseförmåga med egen kraft. Baserat på rörlighet kan bakterier delas in i två grupper enligt följande.

(1) Motile Bakterier:

En bakterie, som har den inre förmågan att förflytta sig i det omgivande mediet, där det förblir suspenderat, är en rörlig bakterie.

(2) icke-motila bakterier:

En bakterie, som inte har egen rörelseförmåga i det omgivande mediet, där det förblir suspenderat, är en icke-rörlig bakterie. Icke-motila bakterier kan visa uppenbar motilitet, som härrör från deras bruna rörelse orsakad av bombardemanget av vattenmolekylerna i det omgivande mediet på bakteriecellerna.

I vått montage, även om formen och storleken på bakterier kan observeras, kan motiliteten hämmas, eftersom suspensionen pressas mellan glidbanan och locket. Det är därför hängande droppberedning eller motilitetstest utförs för tydlig observation av bakteriens rörlighet, förutom deras form och storlek. Det är användbart vid identifiering av bakterier.

Princip:

En mycket liten droppe bakteriesuspension hängs från mitten av ett täckglas i hålrummet i en hålrumsruta. Den hängande droppen observeras under ett mikroskop med oljedämpningsmål. Om bakterierna är motila kan dess celler ses som oregelbundna rörelser i det omgivande mediet.

I motsats därtill, om det är icke-motilt, förblir dess celler statiska i mediet utan någon rörelse eller kan visa brunisk rörelse som härrör från bombarderingen av vattenmolekylerna i mediet på bakteriecellerna.

Material som krävs:

Hålglas, täckglas, petroleumgel eller vaselin, nedsänkningsolja, 24-timmars gammal buljongkultur av bakterier, slinga och mikroskop (förening, mörkfält eller faskontrast).

Procedur:

1. En hålrutschbana rengörs ordentligt under kranvatten, så att vatten inte kvarstår som droppar på dess yta. En kavitetsdia är en glasskiva med en liten runda depression i mitten, där en liten droppe bakteriesuspension kan hängas (Figur 5.3).

2. Sliden torkas genom att torka med bibulous papper och därefter flytta den över flamma eller hålla den i solen.

3. En ring av petroleumgel (eller vaselin) appliceras runt kaviteten.

4. En slinga steriliseras över flamma och kyls. En lapful av bakteriesuspension tas från den 24-timmars gamla buljongkulturen aseptiskt. En liten droppe av suspensionen placeras i mitten av en hölje. Köttkulturen bör inte vara mer än 24 timmar gammal, eftersom bakterier kan förlora sin motilitet, eftersom de blir äldre.

5. Kavitetsskivan är inverterad och placeras på locket på ett sådant sätt att kaviteten täcker droppen.

6. Sliden och skyddet pressas försiktigt samman så att håligheten är förseglad. Försiktighet bör vidtas för att se att ingen del av hålrummet röra droppen.

7. Glidret är inverterat snabbt, så att droppen hänger i kaviteten utan att röra den.

8. Bildskärmen klipps till mikroskopets stadium.

9. Kanten på droppen är inriktad under låg effektmål.

Anledningarna till att fokusera kanten på droppen är följande:

(a) Bättre kontrast uppnås på grund av skillnaden i brytningsindex för droppen och locket.

(b) När droppen hänger tiner den mot kanten, för vilken kanten innehåller mindre antal bakterier som observeras tydligt för motilitet.

(c) Vanligtvis kommer aeroba bakterier mot kanten för att få mer syre för andning, för vilka de kan observeras på kanten.

10. En droppe nedsänkningsolja sätts på locket strax ovanför den hängande droppen och kanten på den hängande droppen observeras under mikro-nedsänkningsmålet för mikroskopet. Företrädesvis bör ett faskontrast- eller mörkfältmikroskop användas för tydlig observation.

Observationer (under oljedämpningsmål):

1. Motilitet:

Motile eller icke-motil

2. Formen av bakterier:

Sfärisk (coccus)

Stångformiga (baciller)

Komma-liknande (vibrio)

Spiral (spirochetes)

3. Arrangemang av bakterier:

Par (diplobacillus / diplococcus)

I fyra (tetrads)

I kedjor (streptokocker / streptobacillus)

Druvliknande kluster (stafylokocker)

Cuboidal (sarkina eller oktett).

4. Storlek på bakterier:

Genom ögonuppskattning gör teckning av fältet under oljedämpningsmål.

(3) Färgning:

Syftet med färgning:

Brytningsindexet för bakterieceller ligger väldigt nära det för vatten, där de suspenderas under observation och även till glasplattans, på vilket de observeras under mikroskop. Därför är det mycket svårt att observera dem tydligt.

För att övervinna denna svårighet färgas cellerna av fläckar, vilket ger djup färg till cellerna och ljusfärgen till det omgivande mediet, i vilket de är suspenderade. De djupfargade cellerna får en klar kontrast mot den ljusa bakgrunden och kan observeras tydligt.

Således är färgning ett sätt att ge färg till de annars färglösa genomskinliga mikroorganismerna med hjälp av olika biologiska färgämnen som kallas "fläckar" för deras mikroskopiska observation.

Kemi av fläckar:

Färgämnen är av tre typer enligt följande:

1. Färger:

De används för färgändamål som för färgning av textilmaterial och för färgning av väggar.

2. Fläckar:

De används för färgning av biologiska eller mikrobiologiska prov. Dessa är mer exakta och krävande.

3. Indikatorer:

De är kemikalier, som ändrar färg med förändring i vätejonskoncentration (pH).

Även om "fläck" är lämplig term, används termen "färgämne" i stor utsträckning i mikrobiologi för att betyda färgämnen. Tidigare framställdes naturliga färgämnen från olika växter. De har i stor utsträckning ersatts av syntetiska färgämnen.

När det första syntetiska färgämnet framställdes från anilin kallas alla syntetiska färgämnen "anilinfärger". De flesta av dessa färgämnen produceras emellertid nu av koltjära, för vilka de nu kallas koltjärafärger. Koltjärgfärgämnena är bensenderivat. En färgmolekyl består av tre komponenter (figur 5.4) som ges nedan.

(a) En bensenring

(b) En kromoforgrupp

(c) En auxokromgrupp

Bensen är ett organiskt färglöst lösningsmedel, medan kromoforen är färgämnet i färgämnet. Bensen kombinerar med kromoforen för att bilda kromogen (Figur 5.5). Eftersom kromogen inte äger fastigheten att dissociera, kan den inte kombinera med cellerna och tvättas lätt bort.

När en kromogen kombineras med en auxokrom bildas en färg eller fläck. Auxokromet överför den elektrolytiska dissociationsegenskapen (saltbildande egenskap) till färgämnet. Således definieras kemiskt en fläck som en organisk förening innehållande en bensenring, en kromoforgrupp och en auxokromgrupp.

Typer av färgning:

Färgning av bakterier är av olika slag som beskrivs nedan (Figur 5.6).

I. Enkel färgning:

Här används endast en fläck. Denna färgning används för att observera form (kakor, baciller, vibrio, spirilli) och arrangemang (singel, par, tetrad, kedja, kluster) av bakterier.

Det är av två typer enligt följande:

A. Grundfärgning:

Vid basfärg används en grundläggande fläck, såsom metylenblå, kristallviolett eller karbolfuchsin, för att fläcka bakteriecellerna. Fläcken binder tätt mot bakteriecellerna och ger en djup färg av fläcken till cellerna, medan det omgivande mediet får en ljusfärg på fläcken.

B. Syrafärgning:

Vid sur färgning används en sur fläck, som eosin eller nigrosin, för att fläcka bakteriecellerna negativt. Fläcken gör det omgivande färgat, medan bakteriecellen förblir färglös.

II. Differentiell färgning:

Här används mer än en fläck. Det utförs för följande ändamål.

A. Separation i grupper:

Dessa differentialfärgningsmetoder utförs för att differentiera bakterier i olika grupper baserat på deras färgningsegenskaper.

Dessa metoder innefattar följande:

(en) Gramfärgning:

Denna färgningsmetod utförs för att skilja mellan gram-positiva och gramnegativa bakterier.

(b) Acid-fast färgning:

Det utförs för att skilja mellan syrafasta och icke-syrafasta bakterier.

B. Visualisering av specifika strukturer av bakterier:

Dessa differentialfärgningsmetoder utförs för att visualisera specifika strukturella komponenter av bakterieceller.

Dessa metoder innefattar följande:

(en) Sporefärgning:

Denna färgningsmetod används för att fläcka endospor av sporbildande bakterier.

(b) Kapselfärgning:

Denna metod används för att fläcka kapseln, som omger kapslade bakterier.

(c) Flagellafärgning:

Det utförs för att visualisera flagella av flagellerade bakterier.

(d) Inkluderingsfärgning:

Denna färgningsmetod utförs för att fånga cellintegrationerna av bakterieceller såsom volutingranuler, glykogengranuler och PBH-granuler.