Experiment för att odla djurvirus i embryonerat kycklingägg (med figur)

Experiment för att odla djurvirus i embryonerat kycklingägg!

Princip:

Virus kan växa endast i levande system. De kan inte växa i icke levande medier som näringsämnen eller näringsbuljong. Därför behöver deras odling värdceller mottagliga för det specifika viruset.

Viruset som bakteriofag, som infekterar och växer i bakterieceller odlas med odlingar av bakterieceller som levande system.

Till exempel odlas viruskolifagen (en bakteriofag) med användning av odlingen av bakterierna E. coli. Däremot kräver animaliska virus, som infekterar och växer i djurens kropp, mottagliga levande djursystem.

De tre levande djursystem som används för odling av animaliska virus i laboratorierna är följande:

1. Känsliga djur:

I denna teknik får viruset som odlas odlas i kroppen av ett levande djur, såsom mus eller marsvin, vilket är mottagligt för det viruset. Denna teknik används inte längre efter att ha ersatts av följande senare, effektiva och ekonomiska tekniker.

2. Vävnadskultur:

Det är en mycket sofistikerad teknik. Här isoleras djurceller som är känsliga för viruset att odlas och även kända för att multiplicera snabbt, först från lämpligt levande vävnad hos ett djur. Dessa celler placeras i ett glas eller plastkärl innehållande ett extremt rikt näringsmedium. Cellerna fäster vid kärlets yta och fortsätter att dela tills hela ytan är täckt med ett sammanflödigt monolag av celler. Detta kallas vävnadsodling.

Därefter ympas viruset som odlas i den mottagliga vävnadsodlingen. Viruset infekterar vävnadsodlingens levande celler, subverterar deras metaboliska maskiner och replikerar snabbt och därmed växer kraftigt i cellerna.

3. Embryonerade kycklingägg:

I denna enkla och ekonomiska teknik injiceras viruset som odlas i ett embryonerat kycklingägg. Viruset växer inom levande kycklingägget och orsakar sjukdom i embryot, manifesterat av flera sjukdomssymptom (cytopatogena effekter) specifika för det viruset. Närvaron av dessa symptom indikerar tillväxten av det viruset inom ägget.

Material som krävs:

Två embryonerade kycklingägg, ljusapparat, tinkturjod, absorberande bomull, 70% alkohol, en liten borrning, 1: 2 utspädning av Newcastle-virus, spruta, steril vasper, steril saltlösning, petriskålar, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator.

Procedur:

1. Två embryonerade kycklingägg lyser med hjälp av en ljusapparat för att visa embryonets livskraft. Embryot är livskraftigt, om det visar rörelse som svar på värme från ljus. Också positionerna i luftsäcken och de stora blodkärlen bestäms och markeras på äggskalet under ljusning (Figur 8.7).

2. Skalet desinficeras över luftsäcken med tinkturjod och får sedan torka. Samma plats är svepad med absorberande bomull som blötläggs med 70% alkohol.

3. Spetsen på en liten borr steriliseras genom doppning i 70% alkohol och flammar sedan.

4. Med hjälp av denna borr görs ett litet hål aseptiskt på skalet över luftväskan i ett område bort från blodkärlen.

5 0, 2 ml av 1: 2-spädningen av Newcastle-virus injiceras aseptiskt i allantohålan hos ett av de två äggen med en steriliserad spruta. Detta görs genom att hålla ägget i vertikalt läge genom att införa nålen i sprutan genom hålet på skalet till dess hål i en 45 ° vinkel, genomträngning av hålmembranet och genomträngning i allantohålan. Detta virusinokulerade ägg fungerar som "testägget".

6. Efter inokuleringen avlägsnas nålen och hålet på skalet förseglas med sterilt hett vasper.

7. I samma teknik ympas 0, 2 ml steril saltlösning i det andra embryonerade kycklingägget, vilket fungerar som "kontrollägget".

8. Båda äggen inkuberas vid 37 ° C i 3 till 4 dagar i en inkubator med korrekt fuktighet.

9. Observationerna noteras varje dag.

10. När döden har bestämts, avlägsnas embryot från sitt skal och innehållet hälls i en petriskål och åter observeras.

11. Alla förorenade material kasseras i en bägare som innehåller blekpulver.

observationer:

1. Äggen lyser varje dag under inkubation och observeras för embryonisk död, vilket framgår av upphörande av rörelsen, vilket vanligen inträffar 3 till 4 dagar efter inokulering av viruset.

2. När döden har bestämts sprids embryot från sitt skal och innehållet hälls i en petriskål. Det observeras för nekrotiska skador och tecken på blödning.

3. Kontrollägget undersöks för bevis på cytopatogena effekter.

4. Observationerna är noterade i tabell 8.2.