Citratutnyttjande test för att kontrollera förmågan hos bakterier att utnyttja citrat som källa till kol

Syftar till att utföra citratutnyttjande test, för att ta reda på en bakteries förmåga att använda citrat som enda kolsyra.

Princip:

Vissa bakterier har förmåga att växa i media utan organiska C och N.

De kan använda natriumcitrat som enda källa till C och ammoniumdivätefosfat (NH4H2P04) som enda källa till N. De använder NH4H2P04 för att få N med produktion av NH3, vilket ökar pH resulterar i en ändring i färgen av bromtymolblått från grönt (pH = 6, 9) till blått (pH över 7, 6).

I citratutnyttjandetestet odlas testbakterierna på agarskikt som inte innehåller organiska C eller N, som hellre innehåller natriumcitrat, NH4H2PO4 och bromtymolblått. Om bakterierna har förmåga att utnyttja citrat som den enda källan till C, visar den tillväxten på skenorna. Det utnyttjar också NH 4 H 2 P0 4 som enda källa till N vilket resulterar i en förändring i snedställningen från grönt till blått.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, Simmons citratagar, isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Beståndsdelarna i Simmons citratagarmedium (innehållande natriumcitrat, NH4H, P04 och bromtymolblått som huvudingredienserna) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerad vatten i en 250 ml konisk flaska genom att skaka och virvla (Figur 7.6).

2. pH-värdet bestäms med pH-papper eller pH-mätare och justeras till 6, 9 med 0, 1N HC1 om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

3. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

4. Innan det stelnar, fördelas mediet i varmt smält tillstånd i 5 provrör (ca 20 ml vardera).

5. Provrören är bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och hålles i ett lutande läge för att kyla och stelna mediet för att få citratagarskenor.

8. Testbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminärflödeskammare, in i skenorna genom att sticka in i rumpan och strimma på ytan av skenorna med hjälp av en flamsteriliserad nål. Nålen steriliseras efter varje ympning.

9. De inokulerade skenorna inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator.

observationer:

1. Tillväxt på snedställd och färg förändras från grönt till blått: Citratutnyttjande positivt.

2. Ingen tillväxt och färg förblir grön: Citratutnyttjande negativ.