Karbohydrat Fermentation Test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att fermentera kolhydrater

Karbohydrat fermentationstest på bakterier för att ta reda på deras förmåga att fermentera kolhydrater!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att fermentera kolhydrater, särskilt sockerarter. Bland dem kan varje bakterie bara jästa vissa sockerarter, medan den inte kan jästa de andra.

Sockerna, som en bakterie kan jäsas och sockerarterna, som det inte kan vara, är karakteristiken för bakterierna.

Kolhydratfermentationstestet utförs för att separat testa bakteriernas förmåga att fermentera sockerarterna som glukos, sackaros, laktos, maltos och xylos samt deras alkoholhaltiga derivat som aesculin, salicin, adonitol, dulcitol och sorbitol. Om bakterierna kan fermentera ett socker eller sockerderivat, produceras syra, vilket minskar pH-värdet, vilket ändrar färgen av bromokresol-lila från lila till gult.

Dessutom, om det är en "aerogen bakterie", produceras både syra och gas (C02), medan om det är ananaerogena bakterier "produceras endast syra utan någon gas. Produktion av gas indikeras genom att den ackumuleras som en bubbla i ett inverterat Durham-rör (ett miniatyrt provrör).

I kolhydratfermentationstestet odlas testbakterierna i en buljongmedium innehållande en av sockerarterna eller sockerderivaten och bromokresollila. Ett inverterat Durham-rör hålls nedsänkt i det.

Om bakterierna "har förmåga att jästa socker eller sockerderivat, ändras buljongens färg från lila till gult. Om gasackumulering ses som en bubbla i Durham-röret, är det en akrogen bakterier, men om ingen gasackumulering ses, är det en anaerogen bakterie.

Material som krävs:

Provrör, Durham-rör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminarkammare, kassett, inkubator, kolhydratbuljong (buljong innehållande specifika socker- eller sockerderivat som glukos, sackaros, laktos, maltos, xylos, aesculin, salicin, adonitol, dulcitol, sorbitol etc.), isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Ingredienserna i kolhydratbuljongmedium (innehållande kolhydrat och bromokresollila som huvudkomponenter) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml buljongen vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom att skaka och virvla (Figur 7.8).

2. pH-värdet bestäms med pH-papper eller pH-mätare och justeras till 6, 8 med 0, 1N HC1 om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. Buljongen fördelas i fem provrör (ca 10 ml vardera).

4. Ett Durham-rör sätts i inverterat skick i buljongen i varje provrör. Durham-rören innehåller luft i dem och flyter. Under sterilisering förflyttar varm ånga denna luft, på grund av vilken de fördjupar i buljongen. Det är således inte nödvändigt att avlägsna luft från Durham-rören genom att fylla dem med buljongen före sterilisering för att hålla dem nedsänkt i buljongen.

5. Provrören är bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav. Alternativt steriliseras 90 ml av det basala mediet (medium utan kolhydratet) i autoklaven och efter kylning tillsätts 10 ml kolhydratlösningen (10%) steriliserad genom membranfiltrering efter kylning. Detta är särskilt viktigt för värmekänsliga kolhydrater, som genomgår nedbrytning under värmesterilisering.

7. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

8. Testbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

9. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C under 24 timmar i en inkubator.

observationer:

1. Färgbuljongen ändras till gul och gas ackumuleras i Durham-röret: Fermentativ för kolhydrat och akrogen.

2. Buljongens färg ändras till gult, men ingen gas ackumuleras i Durham-röret: Fermentativ för kolhydrat och anaerogena.

3. Färgen på buljongen förändras inte: Ej fermentativ för kolhydrater.